Làm thế nào để làm sạch và tái tạo cột sau khi nhiễm bẩn?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Khi cột sắc ký bị nhiễm bẩn, hoạt động sắc ký của nó sẽ hơi khác so với cột không bị nhiễm bẩn. Các cột bị ô nhiễm có thể gây ra các vấn đề về áp suất ngược. Cột pha đảo ngược bị nhiễm bẩn phải được làm sạch và tái sinh để khôi phục lại các điều ......

Khi cột sắc ký bị nhiễm bẩn, hoạt động sắc ký của nó sẽ hơi khác so với cột không bị nhiễm bẩn. Các cột bị ô nhiễm có thể gây ra các vấn đề về áp suất ngược. Cột pha đảo ngược bị nhiễm bẩn phải được làm sạch và tái sinh để khôi phục lại các điều kiện hoạt động ban đầu.
Chìa khóa để tái tạo một cột HPLC bị ô nhiễm là phải biết bản chất của chất gây ô nhiễm và tìm một dung môi thích hợp để loại bỏ nó. Nếu sự nhiễm bẩn là do sự tích tụ của các chất bị giữ lại mạnh trong quá trình tiêm lặp lại, các bước đơn giản để loại bỏ các chất nhiễm bẩn này thường có thể khôi phục lại hoạt động sắc ký. Đôi khi, sau nhiều lần thao tác, cột sắc ký được rửa bằng 90-100% dung môi B (dung môi mạnh hơn trong hệ pha ngược hai dung môi) 20 thể tích để loại bỏ tạp chất. Ví dụ, có thể sử dụng các dung môi không chứa nước như metanol, axetonitril và tetrahydrofuran cho các chất béo còn lại trong cột.

Nói chung, tất cả các phương pháp làm sạch đều có các hình thức tương tự nhau. Dung môi được sử dụng tăng theo độ bền của dung môi. Thường thì dung môi cuối cùng rất kỵ nước (như etyl axetat hoặc thậm chí là hydrocacbon) và có thể được sử dụng để hòa tan các chất không phân cực như lipid và dầu. Chúng ta phải đảm bảo rằng mỗi dung môi trong một loạt dung môi có thể được trộn với dung môi tiếp theo.
Khi kết thúc quá trình làm sạch, cần phải quay trở lại hệ dung môi ban đầu với sự hỗ trợ của dung môi pha trộn có nồng độ trung bình. Ví dụ, isopropanol là một dung môi rất tốt như một bước trung gian vì nó có thể trộn lẫn với n-hexan hoặc diclometan và cả với dung môi pha nước. Tuy nhiên, độ nhớt của isopropanol rất cao và phải đảm bảo tốc độ dòng chảy thấp để tránh áp suất bơm quá cao. Khi xả cột sắc ký, chất lỏng rửa được nối trực tiếp với chai thải từ đầu ra của cột sắc ký, và không thể chảy qua ô phát hiện để tránh nhiễm bẩn cho ô phát hiện.
Cột sắc ký pha đảo không sử dụng dung dịch đệm, vui lòng sử dụng dãy dung môi sau để tái sinh:
100% metanol → 100% axetonitril → 75% axetonitril-25% isopropanol → 100% isopropanol → 100% metylen clorua → 100% n-hexan → 100% metylen clorua → 100% isopropanol → 100% axetonitril.
Cột sắc ký pha ngược sử dụng dung dịch đệm, vui lòng sử dụng dãy dung môi sau để tái sinh:
nước → axetonitril → cloroform (hoặc isopropanol) → axetonitril → nước.