Summary: Sau khi phòng thí nghiệm thu được dòng tế bào mới, trước tiên dòng tế bào đó phải được nuôi cấy và mở rộng, sau đó được đông lạnh. Việc bảo quản lạnh các tế bào trước hết có thể được sử dụng như một phương án dự phòng khi các tế bào bị m......
Sau khi phòng thí nghiệm thu được dòng tế bào mới, trước tiên dòng tế bào đó phải được nuôi cấy và mở rộng, sau đó được đông lạnh. Việc bảo quản lạnh các tế bào trước hết có thể được sử dụng như một phương án dự phòng khi các tế bào bị mất do ô nhiễm và các điều kiện khác. Ngoài ra, hầu hết tất cả các tế bào đều trải qua một mức độ biến đổi nhất định trong quá trình nuôi cấy và di truyền. Để duy trì tính nhất quán của các kết quả thí nghiệm, nói chung không thể nuôi cấy tế bào qua hàng chục thế hệ. Nếu sử dụng lại, cần rã đông và nuôi cấy các tế bào được bảo quản lạnh, ít thụ động trước khi sử dụng.
Có 4 điểm chính trong quá trình đông lạnh tế bào: thu hoạch tế bào, sử dụng chất bảo vệ, tốc độ cấp đông và môi trường bảo quản.
Thu hoạch tế bào
Các tế bào được sử dụng để bảo quản lạnh thường được chọn khi các tế bào có khoảng 90% hợp lưu. Lúc này tế bào sinh trưởng tốt, số lượng tế bào nhiều, nên thay môi trường nuôi cấy trước khi thu hoạch tế bào 24h. Phương pháp thu hoạch tế bào để bảo quản lạnh cũng giống như bình thường. Ly tâm ở 100xg trong 5 phút để thu thập các tế bào và tái sử dụng chúng. Các tế bào sống được đếm. Pha loãng hoặc cô đặc đến hai lần nồng độ tế bào cuối cùng để bảo quản tế bào (thường là 4-10 triệu tế bào / ml), thêm một thể tích tương đương của dung dịch hỗn hợp chất bảo vệ môi trường nuôi cấy đã được chuẩn bị, trộn nhẹ và cho vào ống bảo quản lạnh, bảo quản lạnh.
Sử dụng các chất bảo vệ.
Trong bảo quản lạnh tế bào, DMSO thường được sử dụng như một chất bảo vệ. Trong bảo quản lạnh tế bào, nồng độ cuối cùng của DMSO được sử dụng thường là 5-15%. Nồng độ DMSO trong dung dịch bảo quản lạnh của một tế bào cụ thể có thể được tìm thấy từ ATCC. Đối với các tế bào đặc biệt nhạy cảm, đặc biệt là tế bào hybridoma, có thể sử dụng 95% huyết thanh và 5% DMSO khi bảo quản lạnh sẽ tốt hơn. Khi sử dụng chất bảo vệ, sử dụng môi trường nuôi cấy hoặc huyết thanh để tạo gấp đôi nồng độ cuối cùng, sau đó trộn với một thể tích tương đương của môi trường nuôi cấy tế bào huyền phù. Tốc độ đóng băng tế bào
Tốc độ đóng băng của tế bào được kiểm soát tốt nhất để có đủ thời gian cho tế bào bị mất nước mà không bị tổn thương do mất nước quá nhiều. Đối với hầu hết các tế bào, nhiệt độ giảm từ 1 đến 3 ° C mỗi phút là thích hợp. Thao tác thông thường là đặt các ô ở -20 ° C trong 1-2 giờ, sau đó cho vào tủ lạnh -80 ° C qua đêm (nếu không có tủ lạnh -80 ° C, bạn có thể dùng đá khô để thay thế), và sau đó chuyển sang bình nitơ lỏng hoặc dưới -130 Bảo quản lâu dài trong tủ lạnh ở ℃.
Môi trường lưu trữ
Nhiệt độ bảo quản lâu dài của tế bào là -130 ℃ hoặc thấp hơn. Nhiệt độ của lớp khí trong bình nitơ lỏng nằm trong khoảng -140 ℃ đến -180 ℃. Tế bào có thể được bảo quản trong lớp khí hoặc ngâm trong nitơ lỏng. Nếu có thể, tốt nhất nên bảo quản ở lớp khí, vì nó có thể tránh nitơ lỏng lọt vào kho cấp đông. Ống gây nổ khi đưa tế bào ra ngoài (nhưng theo cách này, chỉ một lượng nhỏ nitơ lỏng có thể được lưu trữ trong bình nitơ lỏng, cần được bổ sung thường xuyên). Các tế bào cũng có thể được bảo quản trong tủ lạnh ở -80 ℃ trong vài tháng hoặc lâu hơn.
英语
阿拉伯语
���ļ���