Làm thế nào để chọn đúng cột?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① Ma trận đóng gói cột sắc ký A. Chất nền silica gel: độ tinh khiết cao, giá thành rẻ, độ bền cao, dễ biến đổi hóa học, nhưng phạm vi pH bị hạn chế. Hầu hết các chất độn nền silica đều ổn định trong khoảng pH từ 2-8, nhưng pha liên kết silica ......

① Ma trận đóng gói cột sắc ký
A. Chất nền silica gel: độ tinh khiết cao, giá thành rẻ, độ bền cao, dễ biến đổi hóa học, nhưng phạm vi pH bị hạn chế. Hầu hết các chất độn nền silica đều ổn định trong khoảng pH từ 2-8, nhưng pha liên kết silica gel được biến đổi đặc biệt có thể ổn định ở pH 1,5-10.
B. Chất nền polyme: phạm vi pH ứng dụng rộng, nhiệt độ ổn định (nhiệt độ cao có thể đạt trên 80 độ) và độ bền cơ học thấp.
②Hình dạng hạt
Hầu hết các chất độn HPLC hiện đại là các hạt hình cầu, nhưng đôi khi là các hạt không đều. Các hạt hình cầu cung cấp áp suất cột thấp hơn, hiệu suất và độ ổn định của cột cao hơn, đồng thời tuổi thọ của cột dài hơn. Khi sử dụng pha hoạt tính có độ nhớt cao; các hạt không đều có diện tích bề mặt riêng lớn hơn và giá thành tương đối thấp.
③Kích thước hạt
Kích thước hạt càng nhỏ thì hiệu suất càng cao và độ phân giải càng cao, nhưng đồng thời sẽ dẫn đến giảm áp suất cột cao hơn. Chọn vật liệu đóng gói 1,5-3μm để giải quyết một số mẫu phức tạp, UPLC có thể sử dụng cách đóng gói 1,5μm; một bao bì kích thước hạt 10μm hoặc lớn hơn khác được sử dụng làm cột bán điều chế hoặc điều chế.
④ Nội dung cacbon
Hàm lượng cacbon của cột sắc ký là tỷ lệ của pha liên kết trên bề mặt của silica gel, có liên quan đến diện tích bề mặt cụ thể và độ phủ liên kết. Hàm lượng cacbon cao cải thiện dung lượng cột, độ phân giải và thời gian phân tích, được sử dụng cho các mẫu phức tạp, yêu cầu độ phân giải cao; hàm lượng cacbon thấp có thời gian phân tích ngắn và thể hiện độ chọn lọc khác nhau, và được sử dụng để phân tích nhanh các mẫu đơn giản và pha hoạt tính chứa nước cao. Điều kiện mẫu. Nói chung, hàm lượng cacbon của C18 dao động từ 7-19%.
⑤ Kích thước lỗ chân lông và diện tích bề mặt cụ thể
Môi trường hấp phụ HPLC là các hạt xốp, và phần lớn bề mặt phản ứng nằm trong các lỗ xốp. Do đó, các phân tử phải đi vào lỗ chân lông để được hấp phụ và tách ra.
Kích thước lỗ xốp của cột sắc ký và diện tích bề mặt riêng là hai khái niệm bổ sung cho nhau. Kích thước lỗ nhỏ thì diện tích bề mặt riêng lớn và ngược lại. Diện tích bề mặt riêng lớn, tăng phản ứng giữa mẫu và pha ngoại quan, tăng khả năng bảo quản, tải mẫu, tách các thành phần phức tạp; diện tích bề mặt riêng nhỏ, thời gian cân bằng nhanh, thích hợp cho phân tích gradient.
⑥ Thể tích lỗ rỗng và độ bền cơ học
khối lượng lỗ chân lông hay còn gọi là “pore volume”. Đề cập đến kích thước của khối lượng rỗng trên mỗi hạt. Nó có thể phản ánh tốt độ bền cơ học của chất độn. Chất độn có thể tích lỗ lớn có độ bền cơ học yếu hơn một chút so với chất độn có thể tích lỗ nhỏ. Chất độn có thể tích lỗ từ 1,5 mL / g trở xuống chủ yếu được sử dụng để tách HPLC, trong khi chất độn có thể tích lỗ lớn hơn 1,5 mL / g được sử dụng cho sắc ký loại trừ kích thước và sắc ký áp suất thấp.
⑦ nắp cuối
Giới hạn cuối cột có thể làm giảm các đỉnh theo đuôi của các hợp chất cơ bản phân cực do tương tác với các nhóm silanol tiếp xúc. Pha ngoại quan không bị chặn sẽ có độ chọn lọc khác so với pha ngoại quan bị chặn, đặc biệt là đối với các mẫu phân cực.